۲-۵-۳ تهیه محلول های پایه تنظیم کننده های رشد
ابتدا ۱۰ میلی گرم از تنظیم کننده رشد با ترازوی دیجیتالی وزن و با هیدروکسید پتاسم ۱ نرمال یا اتانول ۹۶ درصد حل شد و با آب مقطر به حجم ۱۰۰ میلی لیتر رسانیده شد و استوک ۱:۱۰ تهیه شد (یعنی ۱۰ میلی لیتر استوک حاوی ۱ میلی گرم هورمون بود). در نهایت میزان مورد نظر محاسبه و به محیط کشت اضافه گردید. محلول های پایه فوق در فریزر یخچال در دمای ۲۰- درجه سانتیگراد نگهداری و تا مدت ۲ تا ۳ ماه از آنها استفاده شد.
۳-۵-۳ نحوه آماده کردن محیط کشت
برای تهیه یک لیتر محیط کشت، ابتدا ۲۰۰ میلی لیتر آب مقطر در یک بشر یک لیتری ریخته و سپس محلول های پایه عناصر ماکرو، میکرو، ویتامین ها و اسیدهای آمینه به میزان دستورالعمل محیط کشت مورد نظر(MS یا B5) به بشر اضافه گردیدند. محیط کشت بدست آمده با آب مقطر به حجم ۱۰۰۰ میلی لیتر رسانیده شد. مقدار ۳۰ گرم ساکارز به محیط اضافه گردید و با همزن مغناطیسی بهم زده شد تا خوب حل شود. pH محلول با بهره گرفتن از دستگاه pHمتر و KOH و یا HCl 1/0 نرمال و ۱ نرمال در ۸/۵-۷/۵ تنظیم گردید. سپس مقدار ۶ گرم آگار به عنوان جامد کننده محیط اضافه گردید و برای ذوب نمودن آگار، محلول بر روی شعله چراغ گاز قرار گرفت. سپس ۱۰ میلی لیتر محیط کشت در شیشه های کشت ۷۰ میلی لیتری توزیع شد و درب شیشه ها بسته و با بهره گرفتن از دستگاه اتوکلاو تمام اتوماتیک برقی، در دمای ۵/۱۲۱ درجه سانتیگراد و فشار ۱ اتمسفر (۷/۱۴ پی. اس. آی.^[۱۹۹]) به مدت ۲۰-۱۵ دقیقه استریل شدند. لازم به ذکر است که به منظور تهیه محیط کشت حاوی تنظیم کننده رشد، بعد از اضافه نمودن محلول های پایه عناصر غذایی، تنظیم کننده رشد مورد نظر به میزان مورد نظر اضافه می شود.
(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت nefo.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))

جدول ۱-۳ اجزاء تشکیل دهنده محیط کشت موراشیگ و اسکوگ، ۱۹۶۲ (MS)

نام ترکیب
فرمول شیمیایی
غلظت (میلی گرم در لیتر)

Ammonium nitrate

NH₄NO₃

۱۶۵۰

Calcium chloride

CaCl₂, 2H₂O

۴۴۰

عناصر پر مصرف

Magnesium sulphate

MgSO₄, 7H₂O

۳۷۰

Potassium phosphate

KH₂PO₄

۱۷۰

Potassium nitrate

KNO₃

۱۹۰۰

Boric acid

H₃BO₃